PCRPCR引物设计原理引物设计原理PCR反应一般由三个步骤组成:①模板的热变性;②引物复性到单链模板上;③热稳定DNA聚合酶催化的延伸变性在应用TaqDNA聚合酶进行PCR时,变性温度在94-95℃下进行,这也是TaqDNA聚合酶进行30个或30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时能耐受的最高温度。有时把变性时间设计为5min,以便大分子模板DNA彻底变性的概率。对于GC含量为55%或更低的线性DNA模板,推荐PCR的变性条件是94-95℃变...
逆转录-实时荧光定量PCR(RT-)qRT-PCR(RT-)qRT-PCR(Reversetranscription)quantitativerealtimePCRRT-PCRReversetranscription-PCRReal-timePCR样品处理RNA提取及逆转录qPCR数据分析样品处理细菌样品收集1-5*109细菌,置于液氮研磨,加入1mLTrizon,混匀,高温(55℃)细胞样品收集1-5*107细胞,加入1mLTrizol,混匀,进行RNA提取或者放置于-80℃冰箱动物样品取50-100mg组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可...
PCRPCR引物设计及相关软件引物设计及相关软件使用使用主要内容主要内容背景背景PCRPCR引物设计原则引物设计原则常用常用PCRPCR引物设计软件引物设计软件PrimerPremier5.0PrimerPremier5.0介绍介绍Oligo6.22Oligo6.22介绍介绍在线在线Primer3Primer3介绍介绍PCR聚合酶链反应聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,(PolymeraseChainReaction,PCR)PCR)是是8080年代中期发展起来的体外核酸扩年代中期发展起来的体外核酸...
引物设计引物设计引物引物的重要性引物设计的原则引物与PCR引物设计软件如何使用PrimerPremier5.0引物同源性分析引物(引物(primers)primers)引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。→→←←3’3’5’5’SenseprimerAntisenseprimer引物的重要性引物的重要性在整个PCR体系中,引物占有十分重要的地位。PCR的...
PCRPCR引物设计原理引物设计原理PCR反应一般由三个步骤组成:①模板的热变性;②引物复性到单链模板上;③热稳定DNA聚合酶催化的延伸变性在应用TaqDNA聚合酶进行PCR时,变性温度在94-95℃下进行,这也是TaqDNA聚合酶进行30个或30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时能耐受的最高温度。有时把变性时间设计为5min,以便大分子模板DNA彻底变性的概率。对于GC含量为55%或更低的线性DNA模板,推荐PCR的变性条件是94-95℃变...