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  • PCR引物设计原理[共107页]

    PCR引物设计原理[共107页]

    PCRPCR引物设计原理引物设计原理PCR反应一般由三个步骤组成:①模板的热变性;②引物复性到单链模板上;③热稳定DNA聚合酶催化的延伸变性在应用TaqDNA聚合酶进行PCR时,变性温度在94-95℃下进行,这也是TaqDNA聚合酶进行30个或30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时能耐受的最高温度。有时把变性时间设计为5min,以便大分子模板DNA彻底变性的概率。对于GC含量为55%或更低的线性DNA模板,推荐PCR的变性条件是94-95℃变...

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  • 实时荧光定量pcr原理及引物设计[64页]

    实时荧光定量pcr原理及引物设计[64页]

    逆转录-实时荧光定量PCR(RT-)qRT-PCR(RT-)qRT-PCR(Reversetranscription)quantitativerealtimePCRRT-PCRReversetranscription-PCRReal-timePCR样品处理RNA提取及逆转录qPCR数据分析样品处理细菌样品收集1-5*109细菌,置于液氮研磨,加入1mLTrizon,混匀,高温(55℃)细胞样品收集1-5*107细胞,加入1mLTrizol,混匀,进行RNA提取或者放置于-80℃冰箱动物样品取50-100mg组织(新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可...

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  • 引物设计教程[86页]

    引物设计教程[86页]

    PCRPCR引物设计及相关软件引物设计及相关软件使用使用主要内容主要内容背景背景PCRPCR引物设计原则引物设计原则常用常用PCRPCR引物设计软件引物设计软件PrimerPremier5.0PrimerPremier5.0介绍介绍Oligo6.22Oligo6.22介绍介绍在线在线Primer3Primer3介绍介绍PCR聚合酶链反应聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,(PolymeraseChainReaction,PCR)PCR)是是8080年代中期发展起来的体外核酸扩年代中期发展起来的体外核酸...

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  • PCR引物设计原则(共17页)

    PCR引物设计原则(共17页)

    引物设计引物设计引物引物的重要性引物设计的原则引物与PCR引物设计软件如何使用PrimerPremier5.0引物同源性分析引物引物(primers)primers)引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。→→←←3’3’5’5’SenseprimerAntisenseprimer引物的重要性引物的重要性在整个PCR体系中,引物占有十分重要的地位。PCR的...

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  • PCR引物设计原理(最新版)

    PCR引物设计原理(最新版)

    PCRPCR引物设计原理引物设计原理PCR反应一般由三个步骤组成:①模板的热变性;②引物复性到单链模板上;③热稳定DNA聚合酶催化的延伸变性在应用TaqDNA聚合酶进行PCR时,变性温度在94-95℃下进行,这也是TaqDNA聚合酶进行30个或30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时能耐受的最高温度。有时把变性时间设计为5min,以便大分子模板DNA彻底变性的概率。对于GC含量为55%或更低的线性DNA模板,推荐PCR的变性条件是94-95℃变...

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  • PCR引物设计原理

    PCR引物设计原理

    PCRPCR引物设计原理引物设计原理PCR反应一般由三个步骤组成:①模板的热变性;②引物复性到单链模板上;③热稳定DNA聚合酶催化的延伸变性在应用TaqDNA聚合酶进行PCR时,变性温度在94-95℃下进行,这也是TaqDNA聚合酶进行30个或30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时能耐受的最高温度。有时把变性时间设计为5min,以便大分子模板DNA彻底变性的概率。对于GC含量为55%或更低的线性DNA模板,推荐PCR的变性条件是94-95℃变...

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  • 引物的设计原则

    引物的设计原则

    1、引物长度一般为15-30bp,常用的为18-27bp,但不能大于38bp;2、引物GC含量一般为40%-60%,以45-55%为宜,上下游引物GC含量和Tm值要保持接近;3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右,至少要在55-80℃之间,Tm值曲线以选取72度四周为佳,5”到3’的下降外形也有利于引物与模板的结合;4、ΔG值〔自由能〕反响了引物与模板结合的强弱程度,3”端的ΔG值相对要低,且确定值不要超过9,否则不利于正确引发反响,3”末端双...

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