实验一动物细胞基因组DNA的分离、定量和限制性内切酶消化实验前特别注意事项：酚、EB（溴化乙锭）等对人体有毒，在操作有毒试剂，必须戴上PE手套，小心操作，防止进入人体。一、【实验目的】通过本实验学习和掌握：（1）动物基因组提取的原理和方法；（2）DNA的琼脂糖凝胶电泳技术；（3）DNA检测技术(定量、定性)；（4）DNA酶解（消化）技术。二、【基本原理】真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组DNA。真...
目录直接修复目录嘧啶二聚体的直接修复烷基化碱基的直接修复无嘌呤位点的直接修复单链断裂的直接修复目录UVUVPotolyasePotolyase（（光修复酶））300-500nm300-500nm嘧啶二聚体的直接修复目录烷基化剂甲基磺酸乙酯（EMS）对碱基的修饰目录烷基化碱基的直接修复目录DNA链上嘌呤的脱落造成无嘌呤位点，能被DNA嘌呤插入酶（insertase）识别结合，在K+存在的条件下，催化游离嘌呤或脱氧嘌呤核苷插入生成糖苷键，且催化...
目录引起DNA损伤的因素目录目录各种体内外因素所导致的DNA组成与结构的变化称为DNA损伤（DNAdamage）电离辐射电离辐射氧自氧自由基由基烷化剂烷化剂复制错误复制错误核苷类似物核苷类似物目录一、体内因素DNA复制错误DNA自身的不稳定性机体代谢过程中产生的活性氧目录DNA复制错误I目录DNA复制错误II目录DNA自身的不稳定性：DNA结构自身的不稳定性是DNA自发性损伤中最频繁和最重要的因素。当DNA受热或所处环境...
目录碱基切除修复核苷酸切除修复切除修复目录碱基切除修复（baseexcisionrepair）目录碱基错配修复（mismatchrepair）错配是指非Watson-Crick碱基配对。碱基错配修复也可被看作是碱基切除修复的一种特殊形式，主要负责纠正：①复制与重组中出现的碱基配对错误；②因碱基损伤所致的碱基配对错误；③碱基插入；④碱基缺失。目录错配修复系统组成:DNA腺嘌呤甲基化酶(m6A甲基化酶)DNApolymeraseⅢ填补单链DNA缺口Helica...
第四章核苷酸和核酸磷酸二酯键与多核苷酸2碱基的性质和核酸结构3DNA结构4RNA的种类和结构5核酸的变性、复性和杂交6碱基、核苷和核苷酸1第四章核苷酸和核酸DAN一级结构测定与DNA的化学合成基因和基因组DNA超螺旋和染色质结构91011核酸的化学反应和酶法修饰7核酸酶和DNA限制性内切酶8第一节碱基、核苷和核苷酸•一、碱基、核苷和核苷酸•二、核苷酸的生物学功能第一节碱基、核苷和核苷酸第一节碱基、核苷和核苷酸第一节碱基、核苷...
第十一章DNA的复制和修复DNARNAµ°°×Öʸ´ÖÆת¼ÒëÄæת¼RNA¸´ÖÆ第三篇遗传信息第十一章DNA的复制和修复第十三章蛋白质的生物合成第十二章RNA的生物合成和加工第十四章细胞代谢与基因表达调控主要内容第一节DNA的复制第二节DNA的损伤与修复第三节DNA的突变第一节DNA的复制一、DNA的半保留复制（Semi-ConservationReplication）（一）DNA半保留复制的概念概念：DNA复制时，分别以解开的两股单链为模...
第二章染色体与DNA授课内容§1染色体§2DNA的结构§3DNA的复制§4原核生物与真和生物DNA的复制特点§5DNA的修复§6DNA的转座§7SNP的理论与应用第一节染色体由于亲代能够将自己的遗传物质DNA以染色体的形式传给子代，保持物种的稳定性和连续性。因此，人们普遍认为染色体在遗传上起着主要作用。人类22对染色体及性染色体性染色体扫描电镜图§1染色体（一）原核细胞染色体的特征一、染色体概述没有真正的细胞核，DNA一般位于一个...
重组DNA技术第二节又称：分子克隆——在体外将目的DNA与能自主复制的载体连接，形成重组DNA分子——重组DNA分子在受体细胞中复制、扩增及克隆，从而获得DNA分子的拷贝重组DNA技术一、工具酶一、重组DNA技术中常用的工具酶常用工具酶主要包括：限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶逆转录酶一、工具酶限制性核酸内切酶三种类型：I型、II型、III型其中RE和DNA连接酶是最常用的工具酶特点：——I型和III型酶为复合功能酶...
重组DNA技术第二节又称：分子克隆——在体外将目的DNA与能自主复制的载体连接，形成重组DNA分子——重组DNA分子在受体细胞中复制、扩增及克隆，从而获得DNA分子的拷贝重组DNA技术一、工具酶一、重组DNA技术中常用的工具酶常用工具酶主要包括：限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶逆转录酶一、工具酶限制性核酸内切酶三种类型：I型、II型、III型其中RE和DNA连接酶是最常用的工具酶特点：——I型和III型酶为复合功能酶...
真核生物DNA复制过程EukaryoticDNAreplicationprocess第四节真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制的起始需要DNA-polα、polδ和polε参与。一、真核生物复制的起始与原核基本相似现在认为polα主要催化合成引物，然后迅速被具有连续合成能力的DNApolδ和DNApolε所替换，这一过程称为聚合酶转换。DNApolδ负责合成后随链，DNApolε负责合成前导链。真核生物复制的延长发生DNA聚合酶转换3553前导...
真核生物DNA水平上的基因表达调控染色质结构与调控染色质类型•常染色质：间期细胞核内染色质纤维折叠压缩程度低，相对处于伸展状态，用碱性染料染色时着色浅的那些染色质。•异染色质：间期细胞核中，染色质纤维折叠压缩程度高，处于聚缩状态，用碱性染料染色时着色深的那些染色质。常染色质与异染色质的转变常染色质异染色质甲基化CpG未甲基化CpG核小体DNA的甲基化DNA甲基化DNA甲基化酶DNA甲基化抑制基因转录的机理DNA甲基化...
Chapter2DNAreplicationDNA复制DNAReplication/DNA复制Geneticinformationisalsopassedfromgenerationtogeneration.Acrucialpropertyoflifeisthateventhemostcomplexorganismsareabletobecopied.遗传信息也从一个世代到另一个世代进行传递。生命至关重要的特性是：即使是最复杂的生命也能够被复制出来。Semi-conservativereplicationInitiationofrepliactionSemi-discontinuousreplicationElongationofreplicationanditsprotein...
DNA聚合酶第二节参与DNA复制的物质:底物:dATP,dGTP,dCTP,dTTP聚合酶:依赖DNA的DNA聚合酶，简写为DNA-pol模板:解开成单链的DNA母链引物:提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合其他的酶和蛋白质因子(dNMP)n+dNTP→(dNMP)n+1+PPiDNA聚合酶原核生物有5种DNA聚合酶真核生物有15种DNA聚合酶核酸外切酶活性:5´AGCTTCAGGATA3´|||||||||||3´TCGAAGTCCTAGCGAC5´?3’5’外切酶活性:能辨认错配的碱基对，并将其水解（一）原...
第四章DNA的复制第一节DNA复制的特点一、DNA的半保留复制DNA复制的可能机制：全保留复制散布式复制半保留复制二、复制的起点（Orient）复制起点或复制原点，常用Ori或O表示。复制起点的结构（以E.coli为例）1、框架结构(Framestructure)间隔序列变化大，识别序列较保守2、有一系列的反向重复序列（回文结构），故易形成高级结构3、有4个9bp的重复序列—“DNA盒”较保守，TTATNCANA，是OriC复制起始时DNAA蛋白的特异结合位...
第二章DNA的结构第一节DNA的一级结构互补双链：绝大多数生物的DNA线状单链：噬菌体、病毒DNA单链环状：M13、ΦX174环状双链闭合环状：细菌染色体DNA、mitDNA、chlDNA、病毒DNA质粒两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，碱基排在内侧；两条链上的碱基通过氢键相结合，形成碱基对。A＝T，G≡CDNA在碱性条件下稳定性强，不断裂。pH=11.5时仍稳定，而RNA易被碱水解。DNA一级结构对高级结构的影...
真核生物DNA复制(DNAreplicationinEukaryote)1、复制概况a、多个复制起始点，双向复制b、复制子相对较小(14-100kb)，复制速度较慢，大约50bp/minc、复制终止通过复制叉的相遇而终止•已发现的真核生物DNA聚合酶有15种以上。•在哺乳动物细胞中主要的聚合酶酶可能的作用DNA聚合酶α引发两条链的复制DNA聚合酶δ延伸后随链DNA聚合酶ε延伸前导链DNA聚合酶βDNA修复DNA线粒体DNA的复制εδ真核生物DNA复制叉上发生的事件末端隐缩真...
BacterialDNAreplication原核生物DNA的复制DNA聚合酶I(codedbypolA)不是复制大肠杆菌染色体的主要聚合酶，它有3’→5’核酸外切酶活性,保证了DNA复制的准确性。DNAPolymeraseI它的5’→3’核酸外切酶活性也可用来除去冈崎片段5端RNA引物，使冈崎片段间缺口消失，保证连接酶将片段连接起来。DNA聚合酶II(codedbypolB)的活性很低，只有DNA聚合酶I的5%，所以也不是复制中主要的酶。生理功能主要是起修复DNA的作用。DNAPolymeraseII...
DNA的复制生物所以有遗传现象，是与遗传物质DNA的复制有关系的。一、DNA复制的一般特征1、半保留复制模式2、半不连续复制3、需要RNA引物4、双向复制1、DNA半保留复制三种不同的复制假设模型(引自S.Simmons2003)2.半不连续复制Semi-discontinuousreplicationLeadingstrandLaggingstrandReplicationfork前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的，因而称之为DNA的半不连续复制。Semi-discontinuousreplication半...
1.1DNA重组技术的基本工具专题1基因工程11.结合课本插图，记住DNA重组技术所需三种基本工具的作用。2.结合图1－5，识记基因工程中，作为载体需要具备的条件。目标导航重难点击1.DNA重组技术所需三种基本工具的作用。2.基因工程载体需要具备的条件。2方式一：抗虫棉的研究开发是中国发展农业转基因技术，打破跨国公司垄断，抢占国际生物技术制高点的成功事例。抗虫棉的应用使棉铃虫得到了有效控制，使杀虫剂用量降低了70～80%，...
