分子杂交与印迹技术EdwinSouthern印迹法将凝胶分离的DNA片段在胶中变性使其成为单链，再将单链DNA转移到硝酸纤维素膜上。通过探针与膜上DNA的杂交，检测特异性DNA的存在。DNA印迹实验①②③④⑤Southernblot印迹杂交技术的过程将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物上，即印迹；固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过。三种印迹技术的比较•RNA分子小，在转移前...
重组DNA技术第二节又称：分子克隆——在体外将目的DNA与能自主复制的载体连接，形成重组DNA分子——重组DNA分子在受体细胞中复制、扩增及克隆，从而获得DNA分子的拷贝重组DNA技术一、工具酶一、重组DNA技术中常用的工具酶常用工具酶主要包括：限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶逆转录酶一、工具酶限制性核酸内切酶三种类型：I型、II型、III型其中RE和DNA连接酶是最常用的工具酶特点：——I型和III型酶为复合功能酶...
重组DNA技术第二节又称：分子克隆——在体外将目的DNA与能自主复制的载体连接，形成重组DNA分子——重组DNA分子在受体细胞中复制、扩增及克隆，从而获得DNA分子的拷贝重组DNA技术一、工具酶一、重组DNA技术中常用的工具酶常用工具酶主要包括：限制性核酸内切酶DNA连接酶DNA聚合酶逆转录酶一、工具酶限制性核酸内切酶三种类型：I型、II型、III型其中RE和DNA连接酶是最常用的工具酶特点：——I型和III型酶为复合功能酶...
生物芯片技术BiologicalChipTechnique是指将许多特定的DNA片段有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上，然后与待测的荧光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一位点的荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出定性和定量的结果。该技术亦被称作DNA微阵列(DNAmicroarray)。一、基因芯片基因芯片(genechip)基因芯片工作流程示意图是将高度密集排列的蛋白分子作为探针点阵固定...
第二节PCR技术的原理与应用ThePrincipleandApplicationofPCRTechnology聚合酶链反应即PCR，是由美国科学家穆利斯提出的一种体外简化条件下模拟DNA体内复制的DNA快速扩增方法，此技术获得1993年诺贝尔化学奖。PCR技术K.B.Mullis体内DNA的复制体系：耐热性TaqDNA聚合酶的发现1976年，台籍科学家钱嘉韵（AliceChien）从黄石国家公园的嗜热菌Thermusaquaticus中分离出热稳定的TaqDNA聚合酶。1989年，在Science上报道了该酶。同年，1...
第一节分子杂交与印迹技术MolecularHybridizationandBlottingTechnique核酸分子杂交(nucleicacidhybridization)在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形成杂化双链(heteroduplex)。一、分子杂交与印迹技术的原理复性RNADNA（一）印迹技术利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子转移到NC等各种膜上，使之...
调控RNA细菌中RNA介导的调控衰减子编码序列编码序列激活抑制sRNA的配对暴露出RBSsRNA的配对抑制核糖体结合编码序列编码序列•siRNA——源于活体的双链RNA前体或人工制备的小RNA•miRNA——细胞内基因编码的RNA前体衍生而来•piRNA——与piwi蛋白作用的小调控RNA，主要在生殖细胞中表达真核生物中的调控RNARNA干扰Double-strandedRNAinjectC.elegans无杂交探针的阴性对照亲本胚胎senseantisenseNature1998391:806-811Mex-3mRNAde...
色氨酸操纵子（Trpoperon）间隔区RabcdegfABCDELOP色氨酸合酶的α亚基色氨酸合酶的β亚基吲哚甘油磷酸酶邻氨基苯甲酸磷酸核糖转移酶邻氨基苯甲酸合酶邻氨基苯甲酸合酶磷酸核糖邻氨基苯甲酸异构酶邻氨基苯甲酸合酶色氨酸合酶的β亚基吲哚甘油磷酸合酶色氨酸操纵子的结构前导序列结构基因操纵基因启动子调节基因trp操纵子的阻遏系统低水平色氨酸、无阻遏作用高水平色氨酸，具阻遏效应脱辅基阻遏蛋白单体脱辅基阻遏蛋白单体前导区...
乳糖操纵子(lacoperon)FrancoisJacob.JacquesMonod二次生长曲线利用葡萄糖利用乳糖1.TheLactoseOperoninE.coli结构操纵子Lac阻遏物β-半乳糖苷酶半乳糖苷透性酶半乳糖苷转乙酰酶基因长度PI:I基因启动子geneI：调节基因O：操纵位点P：结构基因启动子geneZ,Y,A：结构基因乳糖操纵子的负控诱导调控模式①Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码②这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P），不能...
蛋白质的生物合成（二）除色氨酸（UGG）/甲硫氨酸（AUG）只有一个密码子外，其他氨基酸都有一个以上的密码子：3种氨基酸有6个密码子，5种氨基酸有4个密码子,1种氨基酸有3个密码子，9种氨基酸有2个密码子。同义密码子(synonymouscodon)：对应于同一氨基酸的密码子遗传密码子摇摆假说（Wobblehypothesis）mRNA5’CGU...CGC...CGACGGAGAAGG3’GCG3’→5’GCUUCU内容：codon的前两位碱基和反密码子配对时遵循Watson—Crick原则，而...
蛋白质的生物合成（一）细菌中翻译的起始一、翻译的起始的先发事件1.tRNA负载2.核糖体大小亚基分离tRNA负载1氨基酸活化2tRNA负载不正确的氨基酸将被移除不正确的氨基酸氨酰-tRNA合成酶：它将特定氨基酸与其相应的tRNA偶联tRNA分子：其反密码子与mRNA上的适当密码子形成碱基对氨酰tRNA合成酶的专一性（二）、核糖体的解离•30S亚基•模板mRNA•携带甲酰甲硫氨酸的起始tRNA•3个翻译的起始因子IF1、IF2、IF3•GTP•50S亚基•镁离...
真核生物的转录真核生物的转录和原核转录的不同点：(1)原核只有一种RNA聚合酶，而真核细胞有三种聚合酶；(2)启动子的结构特点不同，真核有三种不同的启动子和有关的元件；(3)真核的转录有很多蛋白质因子的介入。1.真核生物的RNA聚合酶RNApolIRNApolIIRNApolIII分布核仁核质核质亚基种类6～138～1110～15分子量500～600550～650600～700主要产物rRNA前体mRNA前体tRNA和5SrRNA前体最适Mg离子浓度205～105～10α-鹅膏蕈碱不敏感低...
RNA的生物合成（转录）转录(transcription):是指以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚合酶催化下，以4种NTP（ATP、CTP、GTP和UTP）为原料，合成RNA的过程。编码链（非编码链）模板链并非永远在同一条单链上转录方向5335模板链编码链编码链模板链转录方向DNA分子上转录出RNA的区段，称为结构基因。结构基因：RNA聚合酶共同特点是：①以核糖核苷三磷酸（rNTP）为底物；以DNA为模板；②按5′→3′方向合成；③无需引物能从头（...
真核生物DNA复制(DNAreplicationinEukaryote)1、复制概况a、多个复制起始点，双向复制b、复制子相对较小(14-100kb)，复制速度较慢，大约50bp/minc、复制终止通过复制叉的相遇而终止•已发现的真核生物DNA聚合酶有15种以上。•在哺乳动物细胞中主要的聚合酶酶可能的作用DNA聚合酶α引发两条链的复制DNA聚合酶δ延伸后随链DNA聚合酶ε延伸前导链DNA聚合酶βDNA修复DNA线粒体DNA的复制εδ真核生物DNA复制叉上发生的事件末端隐缩真...
BacterialDNAreplication原核生物DNA的复制DNA聚合酶I(codedbypolA)不是复制大肠杆菌染色体的主要聚合酶，它有3’→5’核酸外切酶活性,保证了DNA复制的准确性。DNAPolymeraseI它的5’→3’核酸外切酶活性也可用来除去冈崎片段5端RNA引物，使冈崎片段间缺口消失，保证连接酶将片段连接起来。DNA聚合酶II(codedbypolB)的活性很低，只有DNA聚合酶I的5%，所以也不是复制中主要的酶。生理功能主要是起修复DNA的作用。DNAPolymeraseII...
第七章PCR技术Polymerasechainreaction，聚合酶链式反应PCR的最早设想：1971年，Korana最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆基因”。PCR的实现：1983年，美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的科学家K.B.Mullis等人发明了PCR，又称为基因的体外扩增法。1985年公开报道1987年PCR得到美国的专利权1989年PCR技术被“Science”杂志评为十大科技新闻之一1993年M...
DNA的复制生物所以有遗传现象，是与遗传物质DNA的复制有关系的。一、DNA复制的一般特征1、半保留复制模式2、半不连续复制3、需要RNA引物4、双向复制1、DNA半保留复制三种不同的复制假设模型(引自S.Simmons2003)2.半不连续复制Semi-discontinuousreplicationLeadingstrandLaggingstrandReplicationfork前导链的连续复制和滞后链的不连续复制在生物界是有普遍性的，因而称之为DNA的半不连续复制。Semi-discontinuousreplication半...
1.关于电焊工(1)电焊工必须经安全技术培训、考核，持证上岗。(2)焊接作业现场周围10m范围内不得堆放易燃易爆物品。(3)电焊工作业时应穿戴工作服、绝缘鞋、电焊手套、防护面罩、护目镜等防护用品，高处作业时需系安全带。(4)作业前应检查焊机、线路、焊机外壳保护接零等，确认安全后方可作业。(5)雨、雪、风力六级(含)以上天气不得露天作业。雨、雪后应清除积水、积雪后方可作业。(6)在密封容器内施焊时，应采取通风措施。间歇作...
人工挖孔桩安全技术交底1.严格按安全技术操作规程进行施工.2.下井作业人员必须经市属医院体检合格后方准下井作业.3.下井作业人员必须戴好安全帽,脚穿长筒套鞋,挖掘坚硬岩石时要带上耳塞、风镜，严禁在孔内吸烟。4.工地要设置４－５顶供氧防毒面具作为下井救助受毒人员之用，并备有有效的吊人安全设施供下孔作业人员使用。5.要设置取用方便的安全爬梯作为下井人员安全上下的措施，从孔口到孔底必须常备一条均匀打了结的２０ＭＭ...
