标本：尿培养基：血平板、MAC（EMB、SS、XLD）KIA、MIU、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基及对照管试剂：革兰染液、荚膜染液、V-P试剂、吲哚试剂、95%乙醇溶液器材：孵育箱、接种环、酒精灯、显微镜基本特性基本特性•直接涂片，镜下观察。•接种：在镜下观察细菌的大致形态及其数量，直接将标本用接种环蘸取后接种在血平板、MAC（EMB、SS、XLD）上，进行培养。•温育：37℃孵育18-24小时。•观察菌落形态：血平板上形成圆形、凸起、灰白色、不溶血、光亮的大菌落，相邻菌落易于融合，粘液状，若用接种针蘸取呈长丝状拽起；MAC上形成乳糖发酵产酸的菌落，即红色或粉红色、较大、浑浊、凸起、有光泽的粘液型菌落（EMB上是大、粘稠、红色、易溶于一片的菌落，SS上是红色或粉红色、或具有粉红中心的无色菌落，XLD上呈不透明黄色的菌落）。制片1.载玻片准备：玻片先在95％乙醇中去除油污，再在火焰上烧去粘附的乙醇，待冷，做好标记。2.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2。3.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。4.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后再进行染色。•革兰染色：挑取可疑菌落涂在干净的玻片上自然晾干，用结晶紫（1液）覆盖细菌初染1min，清水冲洗干净玻片再滴加革兰染液（2液）媒染1min，清水冲去表面的染液，用95﹪乙醇（3液）脱洗约30s（以乙醇不再有颜色为好），最后用稀释的复红（4液）复染30s。自然晾干后在显微镜下观察形态。•荚膜染色1.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌膜部位，染色1-2min。2.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。3.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。4.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图于记录表中。•镜下形态：G-杆菌，卵圆形或球杆状细菌，长成双排列，有荚膜，无鞭毛。（如有需要，可进行荚膜染色，染色后菌体呈卵圆形或球杆状，成双排列，菌体外绕以明显的荚膜长较菌体宽2-3倍。）生化鉴别•定科：氧化酶试验（-）、IMViC（--++）•定属：KIA（AA+-）...