第九章亲和纯化技术•利用生物分子间的特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术（Affinitypurification）123技术要点•（1）找与底物专一可逆结合的配基；•（2）将配基通过共价键偶联到基质；•（3）配基与底物吸附；•（4）洗脱目标物。4亲和纯化技术•亲和层析(Affinitychromatography)•亲和过滤（膜分离）•亲和分配（双水相萃取）•亲和反胶团萃取（反胶团萃取）•亲和沉淀（沉淀）•亲和电泳（电泳）5第一节亲和层析(affinityChromatography)•利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的层析技术。•适用于从成份复杂且杂质含量远大于目标物的混合物中提纯目标物。6特点•经过一次处理可得到高纯度活性物质；•设备要求不高、操作简便、特异性强、分离速度快、分离效果好、分离条件温和；•亲和吸附剂通用性较差，专用的吸附剂。7亲和吸附剂：载体—配基•在亲和层析中起可逆结合的特异性物质称为配基（Ligand）。•与配基结合的层析介质称为载体（Matrix）。8一、亲和层析的原理•（1）配基固定化：配基与载体偶联，结合成具有特异亲和性的分离介质。•（2）吸附样品：亲和层析介质选择性吸附生物活性物质.（3）样品解吸：选择适宜的条件使被吸附物活性物质解吸。9二、亲和层析载体（一）、亲和层析对载体的要求：•（1）充分功能化，与配基进行共价连接。•（2）有较好的理化稳定性和生物惰性。•（3）具有高度的水不溶性和亲水性。•（4）具有多孔的立体网状结构。•（5）应为大小均匀的刚性小球。10（二）、常用载体•纤维素(cellulose)•琼脂糖凝胶•葡聚糖凝胶•聚丙烯酰胺凝胶•多孔玻璃珠（Bio-Glass）•其它载体——壳聚糖(Chitosan)111、纤维素•纤维素结构紧密、均一性差，不利于大分子的渗入。•非特异性吸附力较强，空间位阻。•主要用于分离与核酸有关的物质。122、琼脂糖凝胶•琼脂糖浓度有2%、4%、6%，商品为Sepharose2B、4B和6B（Pharmacia）。•保持吸附物质活性，能迅速活化并接上各种功能基团，结构疏松孔径大，流速快。•SepharoseCL,稳定性明显增加，能在pH3~14中应用。13•3、葡聚糖凝胶：•葡聚糖凝胶孔径太小，偶联配基后，孔径更小，应用受到限制。•4、聚丙烯酰胺凝胶：Bio-gelP•有供化学反应的酰胺基，能制得配基含量较高的亲和柱，适用于亲和势比较低的系统。•pH过高或过低的溶液中酰胺基易水解。14•5、多孔玻璃珠：•化学与物理稳定性较好，机械强度高...