Ø限制性核酸内切酶ØDNA聚合酶ⅠØ逆转录酶ØDNA连接酶Ø碱性磷酸酶Ø末端转移酶ØTaqDNA聚合酶一、基因工程的工具酶限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,RE)能识别DNA特异序列，并在特异序列的内部或周围切开DNA双链的酶类。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BamHⅠØ定义：uⅡ类限制性核酸内切酶的特点：GGATCCCCTAGG限制性核酸内切酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类Ø分类：Ø基因工程技术用的是Ⅱ类限制性核酸内切酶1.识别的序列为回文结构2.识别序列的碱基个数为4、6、8个。HindⅡBamHⅠPstⅠGTCCAG平端GACCTGCCTAGGGATCCGGCTGCAGACGTC3′突出粘端5′突出粘端3.切口：粘端或平端。二、基因工程的载体Ø定义:Ø载体按功能分为:能携带目的基因，并能无性繁殖或表达有意义的蛋白质的DNA分子。u克隆载体(cloningvector)u表达载体(expressionvector)Ø克隆载体(cloningvector)Ø表达载体(expressionvector)能插入外源DNA序列并用于扩增的DNA分子称为克隆载体。插入的外源DNA序列并用于扩增和表达的DNA分子称为表达载体。二、基因工程的载体能自主复制：载体DNA分子至少有一个复制起点，在宿主细胞中自主复制，使克隆的外源DNA片段得到扩增。（1）克隆载体u克隆载体必须具备的特点1（1）克隆载体有选择标志：载体DNA至少含有一个选择标志，如抗生素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因（lacZ）、营养缺陷耐受基因等。u克隆载体应具备的基本特点2有RE的切点：载体DNA有适宜的RE的切点，可供外源基因插入时选择，叫多克隆位点（multiplecloningsites，MCS）。（1）克隆载体u克隆载体应具备的基本特点3质粒(plasmid):存在于细菌基因组DNA外的小型双链环状的DNA分子。u常用的克隆载体（1）克隆载体（1）克隆载体除具有克隆载体的必备特点外，还具有:①分子较小，但能容纳较大的目的基因。②拷贝数多。一个细菌中存在较多的拷贝，易于扩增。③易于从一个细菌转移到另一个细菌，即易转化。质粒(plasmid):Øλ噬菌体DNA改造系统：λgt系列（插入型，适用cDNA克隆）。EMBL系列（置换型，适用基因组克隆）。u噬菌体(phage)ØM13噬菌体DNA改造系统（含lacZ基因）：M13mp系列pUC系列（1）克隆载体Ø柯斯质粒（cosmid）载体（又称黏粒载体）。u其他克隆载体Ø酵母人工染色体(yeastartificialchromosome,YAC)。Ø细菌人工染色体(bacterialartificialchromosome,BAC)。Ø动物病毒DNA改造的载体（如腺病毒，腺病毒相关病毒，逆转录病毒）。（2）表达载体Ø分为：原核表达载体真核表达载体